Zielgruppe

WissenschaftlerInnen und Labormitarbeiter/-innen, die in die Technik der HPLC einsteigen oder ihr Wissen auffrischen möchten. Angesprochen sind vor allen Dingen Labormitarbeiter/-innen, welche die Daten der HPLC-Analyse auswerten und bewerten.

Lerniele & Nutzen

Mit diesem Seminar erhalten die Teilnehmenden einen kompletten Überblick über die HPLC. Neben dem apparativen Aufbau einer HPLC-Anlage, werden verschiedene Geräte- und Detektionstechniken vorgestellt. Auch der Einsatz verschiedener stationärer Phasen (Säulen) und deren Retentionsmechanismen (bspw. RP, NP) werden erläutert.

Ein Schwerpunkt des Seminars liegt in der Vermittlung von Fachwissen für Mitarbeiter/-innen in analytischen Laboratorien. Die Auswertung von Chromatogrammen hinsichtlich der Gehalts- und Identitätsbestimmung spielen dabei eine große Rolle.

Das Seminar wird abgerundet mit wertvollen Tipps zur Inbetriebnahme einer HPLC-Anlage und praxisnahen Strategien zur Auswertung von Chromatogrammen.

Grundlagen der HPLC

• Grundbegriffe in der HPLC-Messung
• Apparativer Aufbau einer HPLC-Anlage
• Stationäre Phasen
• Umgang mit Säulen
• Gradientenmessung und isokratische Messung
• Laufmittel und Probenvorbereitung

Das Chromatogramm und seine Aussage

• Peaksymmetrie und Tailing
• Retentionszeit, Retentionsfaktor, Symmetriefaktor und Auflösung
• Peaks analysieren und integrieren
• Bodenzahl und Bodenhöhe

Gehaltsbestimmungen mit der HPLC (Quantifizierung)

• Die Kalibrierung
• Quantifizierung mittels externem Standard
• Quantifizierung mittels internem Standard

Etablierung eines HPLC-Assays

• Inbetriebnahme einer HPLC-Anlage
• Aufbau von Sequenzen
• Etablierung und Validierung der Methode                                                                                                                                                                                                                           
• Tägliche Routine und Systemeignungstests
• Bewertung der Systemstabilität

Zielgruppe

Dieses Seminar richtet sich an Wissenschaftler/-innen und Laborfachkräfte, die bereits mit der HPLC arbeiten und ihre Kenntnisse in der Methodenentwicklung, Optimierung und Fehleranalyse gezielt erweitern möchten.

Lernziele & Nutzen

Im Fokus des Seminars stehen die systematische Entwicklung und Optimierung robuster HPLC-Methoden sowie die sichere Fehleranalyse chromatographischer Probleme.

Sie erhalten fundierte Einblicke in wichtige chromatographische Techniken wie Umkehrphasen-Chromatographie (RP), Hyhile Interaktionschromatographie (HILIC) und Normalphasen-Chromatographie (NP). Darüber hinaus lernen Sie die entscheidenden Einflussfaktoren der Methodenentwicklung kennen &ndash von Säulenparametern und mobilen Phasen bis hin zu Temperatur, Selektivität und Gradientenoptimierung.

Ein weiterer Schwerpunkt liegt auf der effizienten Optimierung bestehender Methoden, insbesondere der Verkürzung von Analysezeiten und der Verbesserung der Trennleistung.

Im Bereich Troubleshooting lernen Sie typische Fehlerbilder systematisch zu erkennen, Ursachen sicher zu identifizieren und geeignete Lösungsstrategien anzuwenden. Besonderes Augenmerk liegt dabei auf der Fehlerprävention, um die Stabilität, Effizienz und Zuverlässigkeit Ihrer HPLC-Analysen langfristig zu erhöhen.

(geringfügige Änderungen vorbehalten)

HPLC-Grundlagen

• Umkehrphasen-Chromatographie (RP)
• Hyhile Interaktionschromatographie (HILIC)
• Normalphasen-Chromatographie (NP)

Methodenentwicklung & Optimierung

• Systematische Entwicklung robuster HPLC-Methoden
• Einfluss von stationärer Phase, mobiler Phase, Temperatur und Säulendimensionen
• Optimierung von isokratischen und Gradientenmethoden
• Verkürzung von Analysezeiten bei gleichbleibender Trennleistung
• Verbesserung von Trennung, Empfindlichkeit und Robustheit
• Herausforderungen und Lösungen bei Pharmakopöe-Methoden

HPLC-Troubleshooting

• Analyse und Diagnose chromatographischer Probleme
• Fehler im Chromatogramm erkennen und bewerten
• Systematische Strategien zur schnellen Fehlerbehebung
• Säulen-, Pumpen- und Systemtests in der Praxis
• Pflege von Säulen und Umgang mit kritischen Proben
• Vorbeugende Maßnahmen zur Sicherung stabiler Analysen

Zielgruppe

Das Seminar richtet sich an HPLC-Anwender, welche die LC-MS-Detektion in ihrem Labor nutzen oder in diese leistungsstarke Technik einarbeiten möchten. Sie lernen die Grundlagen und Besonderheiten der Kopplungstechniker und erfahren, wie quantitative Ergebnisse zuverlässig ermittelt werden.

Lernziele & Nutzen

Die LC-MS-Technik ist eine der wichtigsten Kopplungs-techniken in der analytischen Chemie. Besonders häufig werden die Trennmethoden wie RP-LC (Reversed-Phase) und HILIC (Hyhlic Interaction Liquid Chromatography) mit der Massenspektrometrie kombiniert. Doch welche Methode eignet sich für welche Probeü Hier eine Eingruppierung:

• HILIC-MS: ideal für polare Moleküle wie Metabolite
• RP-LS-MS: besonders für Peptide und Polyphenole in pflanzlichen Extrakten

Neben den bewähren Kombinationen bietet auch die MS-MS-Kopplung entscheidende Vorteile, insbesondere bei der Strukturaufklärung und Quantifizierung von Molekülen.

In diesem Seminar erfahren die Teilnehmer die Vor- und Nachteile einzelner Ionisierungsmodi und erhalten Tipps für die Wahl von mobiler Phase und Puffersystemen. Das Ziel dieses Seminars ist es, Grundkenntnisse in der LC-MS zu vermitteln und durch praxisnahe Tipps den Einstieg in diese Technik zu erleichtern.

Einführung in die LC-MS-Kopplungstechnik

• Grundlagen der Massenspektrometrie
  • Isotopenmuster, Auflösung, Massengenauigkeit
  • Ionisierung: ESI, APCI
  • Unterschiedliche Gerätetypen und deren Einsatzmöglichkeiten
  • Framentierung (MS/MS)
• Grundlagen der HPLC-MS-Kopplung
  • stationäre Phasen (u.a. RP und HILIC)
  • mobile Phasen (Lösungsmittel, Additive)
  • Weitere Einflussfaktoren

LC-MS in der Praxis

• Einführung in die Methodenentwicklung
  • Optimierung von LC- und MS-Parametern (Auswahl von Säule, Lösungsmitteln und Additiven)
  • Probenaufarbeitung (SEP, PP, LLE u.a.)
  • Kalibrierung und Wartung
  • LC-MS-Fehlersuche
• Auswertung und Applikationsbeispiele
  • Mehrfachladungen, Adduktbildung
  • Isotopenmuster
  • Exakte Masse
  • Positiver/Negativer Messmodus
  • Methoden der Quantifizierung
  • Messmodi (SIM, MRM, PRM, u.a.)
  • Anwendungsbeispiele